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相关知识》》》 (4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。一抗是针对抗原的抗体,二抗是针对一抗的抗体。因为一种一抗只识别一种底物。所以现在的设计一般是二抗带上可检测标记,再来检测一抗。而一抗识别底物。这样,当一抗结合到底物上,就可以通过二抗检测出来。经过抗体测定的阳性孔,可以扩大培养,进行克隆,以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。乳化好的标志是取一滴乳化剂滴入水中呈现球形而不分散。(9) 正常人血清和阳性对照血清。 2. 器材: (1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔,ELISA检测仪,50μl及100μl加样器,塑料滴头,小毛巾,洗涤瓶。 (2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。 (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。 |
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