本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗大鼠ELN抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的大鼠ELN与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠ELN抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗大鼠ELN抗体与结合在包被抗体上的大鼠ELN结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,大鼠ELN浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中大鼠ELN的浓度。
1. 在各孔中加入标准品或样品各100μL, 37℃孵育90分钟
2. 加入100μL 生物素化抗体工作液,37℃孵育60分钟
3. 洗涤3次
4. 加入100μL酶结合物工作液, 37℃孵育30分钟
5. 洗涤5次
6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分钟左右
7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长处测量OD值
8. 结果计算
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第16年